分子中二烯醇基具極強(qiáng)的還原性,易被氧化為二酮基而成為去氫抗維生素C,加氫又可還原為維生素C.在堿性溶液或強(qiáng)酸性溶液中能進(jìn)一步水解為二酮古羅糖酸。
C3-OH由于受共軛效應(yīng)的影響,酸性較強(qiáng);C2-OH的酸性極弱,故維生素C一般表現(xiàn)為一元酸,能與碳酸氫鈉作用生成鈉鹽。
分子中有兩個(gè)手性碳原子,故有四個(gè)光學(xué)異構(gòu)體,其中L(+)-維生素C活性。
維生素C和碳酸鈉作用可生成單鈉鹽,不致發(fā)生水解,因雙鍵使內(nèi)酯環(huán)變得較穩(wěn)定;但在強(qiáng)堿中,內(nèi)酯環(huán)可水解,生成酮酸鹽。
維生素C有共軛雙鍵,在稀礦酸溶液中,在245nm波長(zhǎng)處有吸收;若在中性或堿性條件下,則紅移至265nm處。
鑒別試驗(yàn):
⑴與硝酸反應(yīng)方法:取本品0.2g,加水10ml溶解。取該溶液5ml,加硝酸銀試液0.5ml,即生成銀的黑色沉淀。
原理:維生素C分子中有二烯醇基,具強(qiáng)還原性,可被硝酸銀氧化為去氫維生素C,同時(shí)可產(chǎn)生黑色銀沉淀。
⑵與2,6-二氯靛酚反應(yīng)方法:取本品0.2g,加水10ml溶解。取該溶液5ml,加2,6-二氯靛酚試液1~2滴,試液的顏色即消失。
原理:2.6-二氯靛酚為一染料,其氧化型在酸性介質(zhì)中為玫瑰紅色,堿性介質(zhì)中微藍(lán)色。與抗壞血酸作用后生成還原型的物色的酚亞胺。
⑶與其它氧化劑反應(yīng)維生素C還可被亞甲藍(lán)、高錳酸鉀、堿性酒石酸銅試液、磷鉬酸等氧化劑氧化為去氫維生素C,同時(shí),維生素C可使這些試劑褪色,產(chǎn)生沉淀或顯色。
⑷利用維生素C具糖類性質(zhì)的反應(yīng)維生素C可在三氯醋酸或鹽酸存在下水解、脫羧,生成戊糖,再失水,轉(zhuǎn)變?yōu)榭啡?,加入吡咯,加熱?0℃產(chǎn)生藍(lán)色。
⑸紫外分光光度法維生素C在0.01mol/L鹽酸液中,在243nm波長(zhǎng)處有的吸收,利用此特征進(jìn)行鑒別。
含量測(cè)定:
碘量法:溶劑:水和稀醋酸,指示劑:淀粉。
操作中加入稀醋酸10ml使滴定在酸性溶液中進(jìn)行。在酸性介質(zhì)中維生素C受空氣中氧的氧化作用減慢,但樣品溶于稀酸后仍需立即進(jìn)行滴定。
加新沸過(guò)的冷水液是為了減少水中溶解氧對(duì)測(cè)定的影響。
如片劑,溶解后應(yīng)濾過(guò),取續(xù)濾液測(cè)定;注射液測(cè)定時(shí)要加2ml丙酮,以消除注射液內(nèi)含有的抗氧劑亞硫酸氫鈉對(duì)測(cè)定的影響。
抗生素類藥物β-內(nèi)酰胺類抗生素本類抗生素包括青霉素族和頭孢菌素族,他們的分子結(jié)構(gòu)中均含有β-內(nèi)酰胺環(huán)。
基本結(jié)構(gòu):
分子中都有一個(gè)游離羧基和酰胺側(cè)鏈。
青霉素:β-內(nèi)酰胺環(huán)和氫化噻唑環(huán)頭孢菌素:β-內(nèi)酰胺環(huán)和氫化噻嗪環(huán)性質(zhì):
溶解度:青霉素和頭孢菌素分子中的游離羧基具有相當(dāng)強(qiáng)的酸性,能與無(wú)機(jī)堿或某些有機(jī)堿形成鹽。其堿金屬鹽易溶于水,而有機(jī)堿鹽難溶于水,易溶于甲醇等有機(jī)溶劑。
旋光性:青霉素族分子中含有三個(gè)手性碳原子,頭孢菌素族含有兩個(gè)手性碳原子,都具有旋光性。
紫外吸收特性青霉素分子中的母核部分無(wú)紫外吸收,但出側(cè)鏈酰胺基上R如具苯環(huán)共軛系統(tǒng),則有紫外吸收特性。
頭孢菌素由于母核部分具有O-C=N-C=C結(jié)構(gòu),故有紫外吸收。
β-內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性β-內(nèi)酰胺環(huán)是青霉素族結(jié)構(gòu)最不穩(wěn)定的地方,如與酸、堿、青霉素酶、羥胺及某些金屬離子(銅、鉛、汞和銀)等作用時(shí),易發(fā)生水解和分子重排,導(dǎo)致β-內(nèi)酰胺環(huán)的破壞而失去活性。
鑒別試驗(yàn):
⑴鉀、鈉鹽的火焰反應(yīng)⑵呈色反應(yīng)①羥肟酸鐵反應(yīng):青霉素及頭孢菌素在堿性中與羥胺作用,β-內(nèi)酰胺環(huán)破裂生成羥肟酸,在稀酸中與高鐵離子呈色。
頭孢哌酮:紅棕色;氨芐西林:紫紅色;頭孢氨芐:紅褐~褐色;頭孢噻吩鈉:紅褐色;普魯卡因青霉素:紫紅色;頭孢唑啉鈉:紅棕色。
②硫酸-硝酸呈色反應(yīng):頭孢菌素能與硫酸-硝酸反應(yīng)后成色。
頭孢噻吩鈉:紅棕色;頭孢氨芐:黃色;頭孢噻肟鈉:亮黃色。
③茚三酮反應(yīng):某些具有α-氨基的本類藥物(如氨芐西林)遇茚三酮即顯藍(lán)紫色。
④與斐林試劑反應(yīng):本類藥物具有類似肽鍵結(jié)構(gòu),可產(chǎn)生雙縮脲反應(yīng)。開(kāi)環(huán)分解,使堿性酒石酸銅鹽還原顯紫色。阿莫西林、氨芐西林鈉可采用本法鑒別。
⑤變色酸-硫酸呈色反應(yīng):阿莫西林加變色酸-硫酸實(shí)際混合后,于150℃加熱2~3min,因分解除甲醛與變色酸縮合而呈深褐色。
⑥與重氮苯磺酸呈色反應(yīng):頭孢菌素族7位側(cè)鏈含有酚羥基基團(tuán)時(shí),能與重氮苯磺酸試液產(chǎn)生偶合反應(yīng),顯橙黃色。
⑦與銅鹽呈色:頭孢氨芐加醋酸、硫酸銅、氫氧化鈉試液后,生成銅配位鹽,顯橄欖綠色。
⑶沉淀反應(yīng)①在稀酸中生成白色沉淀:青霉素鉀和青霉素鈉加水溶解后,加稀鹽酸2滴,即析出難溶于水的游離基白色沉淀。此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或過(guò)量的鹽酸中成鹽。
②有機(jī)胺鹽的特殊反應(yīng)重氮化-偶合反應(yīng):普魯卡因青霉素水溶液酸化后,顯普魯卡因芳伯氨基的重氮化-偶合反應(yīng),生成偶氮染料紅色沉淀。外語(yǔ)學(xué)習(xí)網(wǎng)
與三硝基苯酚的反應(yīng):芐星青霉素經(jīng)氫氧化鈉堿化后,用乙醚提取,蒸去乙醚后的殘?jiān)卸S基乙二胺,加稀乙醇使殘?jiān)芙?,加三硝基苯酚的飽和溶液,加熱后放冷,即析出二芐基乙二胺苦味酸結(jié)晶。
⑷光譜法①紫外分光光度法吸收波長(zhǎng)鑒定法水解產(chǎn)物的吸收波長(zhǎng)鑒定法②紅外吸收光譜③核磁共振光譜⑸色譜法①薄層色譜法②高效液相色譜法含量測(cè)定⑴碘量法(芐星青霉素)
青霉素或頭孢菌素分子不消耗碘,其降解產(chǎn)物消耗碘。
反應(yīng)分兩步進(jìn)行:第一步反應(yīng)是按化學(xué)計(jì)算量進(jìn)行;第二步青霉噻唑烷酸在酸性條件下被碘氧化的反應(yīng)受溫度、pH、時(shí)間等諸多因素影響,故耗碘量沒(méi)有固定的量關(guān)系。因此試驗(yàn)過(guò)程中要嚴(yán)格控制溫度,同時(shí)采用與青霉素標(biāo)準(zhǔn)品平行對(duì)照測(cè)定,則可抵消上述可變因素的影響。
碘與青霉噻唑酸的作用以Ph4.5,溫度在24~26℃為。1摩爾青霉素能吸收8摩爾的碘,故本法的靈敏度較高。中華考試網(wǎng)(www.Examw。com)
注意:在滴定終點(diǎn)時(shí)放慢滴定速度,并強(qiáng)力振搖;如果滴定至終點(diǎn)又返現(xiàn)藍(lán)色,說(shuō)明真正的終點(diǎn)尚未到達(dá)。
⑵汞量法(青霉素鈉、青霉素鉀)
青霉素分子不與汞鹽反應(yīng),而其堿性水解產(chǎn)物青霉噻唑酸及繼續(xù)水解生成的青霉胺都能與汞鹽定量反應(yīng),根據(jù)消耗的汞鹽量可以計(jì)算青霉素的含量。
電位滴定法:指示電極:鉑電極;參比電極:汞-硫酸亞汞電極。滴定液:硝酸汞。
每1ml的硝酸汞滴定液(0.02mol/L)相當(dāng)于7.128mg的總青霉素。
總青霉素的百分含量與降解產(chǎn)物的百分含量之差值即為青霉素的含量。
注意:青霉素含量計(jì)算以第二次滴定終點(diǎn)為依據(jù);水解必須完全;空白試驗(yàn)也要稱取供試品,但不經(jīng)氫氧化鈉水解;與碘量法比較,汞量法測(cè)定青霉素的主要優(yōu)點(diǎn)是不需要青霉素標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照,汞鹽滴定液用EDTA標(biāo)定即可。
⑶酸堿滴定法(苯唑西林鈉)
⑷紫外-可見(jiàn)分光光度法⑸高效液相色譜法氨基糖苷類抗生素
C3-OH由于受共軛效應(yīng)的影響,酸性較強(qiáng);C2-OH的酸性極弱,故維生素C一般表現(xiàn)為一元酸,能與碳酸氫鈉作用生成鈉鹽。
分子中有兩個(gè)手性碳原子,故有四個(gè)光學(xué)異構(gòu)體,其中L(+)-維生素C活性。
維生素C和碳酸鈉作用可生成單鈉鹽,不致發(fā)生水解,因雙鍵使內(nèi)酯環(huán)變得較穩(wěn)定;但在強(qiáng)堿中,內(nèi)酯環(huán)可水解,生成酮酸鹽。
維生素C有共軛雙鍵,在稀礦酸溶液中,在245nm波長(zhǎng)處有吸收;若在中性或堿性條件下,則紅移至265nm處。
鑒別試驗(yàn):
⑴與硝酸反應(yīng)方法:取本品0.2g,加水10ml溶解。取該溶液5ml,加硝酸銀試液0.5ml,即生成銀的黑色沉淀。
原理:維生素C分子中有二烯醇基,具強(qiáng)還原性,可被硝酸銀氧化為去氫維生素C,同時(shí)可產(chǎn)生黑色銀沉淀。
⑵與2,6-二氯靛酚反應(yīng)方法:取本品0.2g,加水10ml溶解。取該溶液5ml,加2,6-二氯靛酚試液1~2滴,試液的顏色即消失。
原理:2.6-二氯靛酚為一染料,其氧化型在酸性介質(zhì)中為玫瑰紅色,堿性介質(zhì)中微藍(lán)色。與抗壞血酸作用后生成還原型的物色的酚亞胺。
⑶與其它氧化劑反應(yīng)維生素C還可被亞甲藍(lán)、高錳酸鉀、堿性酒石酸銅試液、磷鉬酸等氧化劑氧化為去氫維生素C,同時(shí),維生素C可使這些試劑褪色,產(chǎn)生沉淀或顯色。
⑷利用維生素C具糖類性質(zhì)的反應(yīng)維生素C可在三氯醋酸或鹽酸存在下水解、脫羧,生成戊糖,再失水,轉(zhuǎn)變?yōu)榭啡?,加入吡咯,加熱?0℃產(chǎn)生藍(lán)色。
⑸紫外分光光度法維生素C在0.01mol/L鹽酸液中,在243nm波長(zhǎng)處有的吸收,利用此特征進(jìn)行鑒別。
含量測(cè)定:
碘量法:溶劑:水和稀醋酸,指示劑:淀粉。
操作中加入稀醋酸10ml使滴定在酸性溶液中進(jìn)行。在酸性介質(zhì)中維生素C受空氣中氧的氧化作用減慢,但樣品溶于稀酸后仍需立即進(jìn)行滴定。
加新沸過(guò)的冷水液是為了減少水中溶解氧對(duì)測(cè)定的影響。
如片劑,溶解后應(yīng)濾過(guò),取續(xù)濾液測(cè)定;注射液測(cè)定時(shí)要加2ml丙酮,以消除注射液內(nèi)含有的抗氧劑亞硫酸氫鈉對(duì)測(cè)定的影響。
抗生素類藥物β-內(nèi)酰胺類抗生素本類抗生素包括青霉素族和頭孢菌素族,他們的分子結(jié)構(gòu)中均含有β-內(nèi)酰胺環(huán)。
基本結(jié)構(gòu):
分子中都有一個(gè)游離羧基和酰胺側(cè)鏈。
青霉素:β-內(nèi)酰胺環(huán)和氫化噻唑環(huán)頭孢菌素:β-內(nèi)酰胺環(huán)和氫化噻嗪環(huán)性質(zhì):
溶解度:青霉素和頭孢菌素分子中的游離羧基具有相當(dāng)強(qiáng)的酸性,能與無(wú)機(jī)堿或某些有機(jī)堿形成鹽。其堿金屬鹽易溶于水,而有機(jī)堿鹽難溶于水,易溶于甲醇等有機(jī)溶劑。
旋光性:青霉素族分子中含有三個(gè)手性碳原子,頭孢菌素族含有兩個(gè)手性碳原子,都具有旋光性。
紫外吸收特性青霉素分子中的母核部分無(wú)紫外吸收,但出側(cè)鏈酰胺基上R如具苯環(huán)共軛系統(tǒng),則有紫外吸收特性。
頭孢菌素由于母核部分具有O-C=N-C=C結(jié)構(gòu),故有紫外吸收。
β-內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性β-內(nèi)酰胺環(huán)是青霉素族結(jié)構(gòu)最不穩(wěn)定的地方,如與酸、堿、青霉素酶、羥胺及某些金屬離子(銅、鉛、汞和銀)等作用時(shí),易發(fā)生水解和分子重排,導(dǎo)致β-內(nèi)酰胺環(huán)的破壞而失去活性。
鑒別試驗(yàn):
⑴鉀、鈉鹽的火焰反應(yīng)⑵呈色反應(yīng)①羥肟酸鐵反應(yīng):青霉素及頭孢菌素在堿性中與羥胺作用,β-內(nèi)酰胺環(huán)破裂生成羥肟酸,在稀酸中與高鐵離子呈色。
頭孢哌酮:紅棕色;氨芐西林:紫紅色;頭孢氨芐:紅褐~褐色;頭孢噻吩鈉:紅褐色;普魯卡因青霉素:紫紅色;頭孢唑啉鈉:紅棕色。
②硫酸-硝酸呈色反應(yīng):頭孢菌素能與硫酸-硝酸反應(yīng)后成色。
頭孢噻吩鈉:紅棕色;頭孢氨芐:黃色;頭孢噻肟鈉:亮黃色。
③茚三酮反應(yīng):某些具有α-氨基的本類藥物(如氨芐西林)遇茚三酮即顯藍(lán)紫色。
④與斐林試劑反應(yīng):本類藥物具有類似肽鍵結(jié)構(gòu),可產(chǎn)生雙縮脲反應(yīng)。開(kāi)環(huán)分解,使堿性酒石酸銅鹽還原顯紫色。阿莫西林、氨芐西林鈉可采用本法鑒別。
⑤變色酸-硫酸呈色反應(yīng):阿莫西林加變色酸-硫酸實(shí)際混合后,于150℃加熱2~3min,因分解除甲醛與變色酸縮合而呈深褐色。
⑥與重氮苯磺酸呈色反應(yīng):頭孢菌素族7位側(cè)鏈含有酚羥基基團(tuán)時(shí),能與重氮苯磺酸試液產(chǎn)生偶合反應(yīng),顯橙黃色。
⑦與銅鹽呈色:頭孢氨芐加醋酸、硫酸銅、氫氧化鈉試液后,生成銅配位鹽,顯橄欖綠色。
⑶沉淀反應(yīng)①在稀酸中生成白色沉淀:青霉素鉀和青霉素鈉加水溶解后,加稀鹽酸2滴,即析出難溶于水的游離基白色沉淀。此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或過(guò)量的鹽酸中成鹽。
②有機(jī)胺鹽的特殊反應(yīng)重氮化-偶合反應(yīng):普魯卡因青霉素水溶液酸化后,顯普魯卡因芳伯氨基的重氮化-偶合反應(yīng),生成偶氮染料紅色沉淀。外語(yǔ)學(xué)習(xí)網(wǎng)
與三硝基苯酚的反應(yīng):芐星青霉素經(jīng)氫氧化鈉堿化后,用乙醚提取,蒸去乙醚后的殘?jiān)卸S基乙二胺,加稀乙醇使殘?jiān)芙?,加三硝基苯酚的飽和溶液,加熱后放冷,即析出二芐基乙二胺苦味酸結(jié)晶。
⑷光譜法①紫外分光光度法吸收波長(zhǎng)鑒定法水解產(chǎn)物的吸收波長(zhǎng)鑒定法②紅外吸收光譜③核磁共振光譜⑸色譜法①薄層色譜法②高效液相色譜法含量測(cè)定⑴碘量法(芐星青霉素)
青霉素或頭孢菌素分子不消耗碘,其降解產(chǎn)物消耗碘。
反應(yīng)分兩步進(jìn)行:第一步反應(yīng)是按化學(xué)計(jì)算量進(jìn)行;第二步青霉噻唑烷酸在酸性條件下被碘氧化的反應(yīng)受溫度、pH、時(shí)間等諸多因素影響,故耗碘量沒(méi)有固定的量關(guān)系。因此試驗(yàn)過(guò)程中要嚴(yán)格控制溫度,同時(shí)采用與青霉素標(biāo)準(zhǔn)品平行對(duì)照測(cè)定,則可抵消上述可變因素的影響。
碘與青霉噻唑酸的作用以Ph4.5,溫度在24~26℃為。1摩爾青霉素能吸收8摩爾的碘,故本法的靈敏度較高。中華考試網(wǎng)(www.Examw。com)
注意:在滴定終點(diǎn)時(shí)放慢滴定速度,并強(qiáng)力振搖;如果滴定至終點(diǎn)又返現(xiàn)藍(lán)色,說(shuō)明真正的終點(diǎn)尚未到達(dá)。
⑵汞量法(青霉素鈉、青霉素鉀)
青霉素分子不與汞鹽反應(yīng),而其堿性水解產(chǎn)物青霉噻唑酸及繼續(xù)水解生成的青霉胺都能與汞鹽定量反應(yīng),根據(jù)消耗的汞鹽量可以計(jì)算青霉素的含量。
電位滴定法:指示電極:鉑電極;參比電極:汞-硫酸亞汞電極。滴定液:硝酸汞。
每1ml的硝酸汞滴定液(0.02mol/L)相當(dāng)于7.128mg的總青霉素。
總青霉素的百分含量與降解產(chǎn)物的百分含量之差值即為青霉素的含量。
注意:青霉素含量計(jì)算以第二次滴定終點(diǎn)為依據(jù);水解必須完全;空白試驗(yàn)也要稱取供試品,但不經(jīng)氫氧化鈉水解;與碘量法比較,汞量法測(cè)定青霉素的主要優(yōu)點(diǎn)是不需要青霉素標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照,汞鹽滴定液用EDTA標(biāo)定即可。
⑶酸堿滴定法(苯唑西林鈉)
⑷紫外-可見(jiàn)分光光度法⑸高效液相色譜法氨基糖苷類抗生素