第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查
多由結(jié)構(gòu)改造來(lái)，可能帶來(lái)原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物以及試劑溶劑等，是一重要項(xiàng)目。此外，有些甾體藥物還規(guī)定其他檢查項(xiàng)目。
一、游離磷酸
示例 中國(guó)藥典收載地塞米松磷酸鈉的檢查，方法為：
稱(chēng)取供試品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解；另取標(biāo)準(zhǔn)磷酸鹽溶液[精密稱(chēng)取經(jīng)105℃干燥2h的磷酸二氫鉀0.35g，置1000ml量瓶中，加硫酸溶液（3→10）10ml與水適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻；臨用時(shí)再稀釋10倍]4.0ml，置另一25ml量瓶中，加水11ml；各精密加鉬酸銨硫酸試液2.5ml與1-氨基-2萘酚-4-磺酸溶液（另取無(wú)水亞硫酸鈉5g，亞硫酸氫鈉94.3G與1-氨基-萘酚-4-磺酸0.7g，充分混合，臨用時(shí)取此混合物1.5g加水10ml使溶解，必要時(shí)過(guò)濾）1ml，加水至刻度，搖勻，在20℃放置30~50min，在740nm的波長(zhǎng)處測(cè)定考試，大收集整理吸收度。供試品溶液的吸收度不得大于對(duì)照溶液的吸收度。
原理：酸性條件下，磷酸與鉬酸作用生成磷鉬酸銨，再經(jīng)還原形成磷鉬酸藍(lán)（鉬藍(lán)），在740nm波長(zhǎng)處有吸收。
二、甲醇和丙酮
示例 地塞米松磷酸鈉方法：
精密量取甲醇10μl（相當(dāng)于7.9mg）與丙酮100μl（相當(dāng)于79mg），置100ml量瓶中，精密加0.1%（ml/ml）正丙醇（內(nèi)標(biāo)物質(zhì)）溶液20ml，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照液；另取本品月約0.16g，精密稱(chēng)定，置10ml量瓶中，精密加入上述內(nèi)標(biāo)溶液2ml，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品。取上述溶液，照氣相色譜法，用高分子多孔小球色譜柱（按正丙醇計(jì)算的理論板數(shù)應(yīng)大于700），在柱溫150℃測(cè)定。含丙酮不得過(guò)5.0%（g/g），并不得出現(xiàn)甲醇峰。
本品在生產(chǎn)工藝中使用大量甲醇和丙酮，因此要檢查。甲醇的檢測(cè)限為3.1ng.
三、雌酮
炔雌酮中雌酮檢查方法如下：
取本品5mg溶于0.5ml乙醇，加間二硝基苯0.05g，再加新配制的稀氫氧化鉀-乙醇液0.5ml，在暗處放置1h后，再加乙醇10ml
時(shí)，溶液呈現(xiàn)的顏色不得比下面的對(duì)照液更深。
對(duì)照液：不加本品同樣方法制成。
原理：Zimmermann反應(yīng)，羰基的鄰位具有活潑亞甲基的化合物，在堿性的氫氧化鉀乙醇溶液中，與間二硝基苯反應(yīng)呈紅~藍(lán)色。雌酮是17-酮甾類(lèi)，因此根據(jù)該反應(yīng)生成紫紅色化合物，必須使用高純度的間二硝基苯，否則呈褐色而難于判定。
四、硒
五、其他甾體
甾體激素藥物多由甾體母體或結(jié)構(gòu)類(lèi)似的其他甾體激素制備而來(lái)，也具有一定的藥理作用而又互相不相同，使其他甾體或有關(guān)物質(zhì)的限度檢查顯得非常必要，成為甾體激素藥物純度檢查的一個(gè)重要項(xiàng)目。TLC和HPLC為各國(guó)近版藥典采用36中原料中34中采用薄層色譜法檢查；10中原料已采用HPLC法。
薄層色譜法藥典色譜條件：
1.薄層板：大多采用硅膠G板，少數(shù)采用硅膠GF254或硅膠HF254.
2.供試液和對(duì)照液的制備：取一定量供試品和對(duì)照品，分別用溶劑（如氯仿-甲醇或甲醇或氯仿或丙酮）配成一定濃度的溶液。
3.展開(kāi)劑系統(tǒng)：各種不同比例的二氯甲烷-乙醚-甲醇-水混合溶劑用得最多；還有苯、無(wú)水乙醇、二氯甲烷-甲醇-水、氯仿-甲醇、二氯甲烷-醋酸甲酯-水、苯-丙酮等混合溶劑。
4.顯色劑：堿性四氮唑藍(lán)試液；硫酸-乙醇（2：8或1：1或3：7）；20%硫酸；10%磷鉬酸-乙醇液。
5.檢測(cè)法：用堿性四氮唑藍(lán)試液作顯色劑時(shí)，以展開(kāi)劑展開(kāi)后，晾干，在105℃干燥10min，放冷，噴以堿性四氮唑藍(lán)試液，立即檢視；用硫酸-乙醇顯色劑時(shí)，以展開(kāi)劑展開(kāi)后，晾干，噴以硫酸-乙醇，在120℃或100℃加熱5min，放冷置紫外光燈（365nm）下檢視；用20%硫酸顯色時(shí)，用展開(kāi)劑展開(kāi)后，晾干，噴以20%硫酸顯色，在105℃加熱10min后檢視；用10%磷鉬酸-乙醇液時(shí)，以展開(kāi)劑展開(kāi)后，晾干，噴以10%磷鉬酸-乙醇液，在100℃加熱10~15min，在日光下檢視；某些甾體激素藥物，如醋酸去氧皮質(zhì)酮、地塞米考，試大收集整理松磷酸鈉、倍他米松磷酸鈉等采用硅膠GF254薄層板，用展開(kāi)劑展開(kāi)后，晾干，直接在紫外燈（254nm）下檢視。
判定法：按各藥品項(xiàng)下規(guī)定得雜質(zhì)斑點(diǎn)的數(shù)目和顏色的要求進(jìn)行判定。
（二）高效液相色譜法 色譜條件如下：
1.色譜填充柱：十八烷基硅烷鍵和硅膠。
2.流動(dòng)相：各種不同比例的甲醇-水混合溶劑。
3.檢測(cè)器：紫外（214nm，254nm，281nm，230nm，288nm）。
4.供試液和對(duì)照液的制備：將供試品用甲醇溶解配制成高（1）、低（2）二種濃度的溶液。
5.判定法：溶液
（1）顯示的雜質(zhì)峰數(shù)不得超過(guò)1個(gè)或3個(gè)或4個(gè)等；各雜質(zhì)峰面積劑其總和不得大于溶液
（2）主峰面積的1/2或3/4或雜質(zhì)峰面積不得大于溶液
2）主峰面積的3/4（如：黃體酮）。
即按各藥品項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì)峰的數(shù)目和面積的要求進(jìn)行判定。
多由結(jié)構(gòu)改造來(lái)，可能帶來(lái)原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物以及試劑溶劑等，是一重要項(xiàng)目。此外，有些甾體藥物還規(guī)定其他檢查項(xiàng)目。
一、游離磷酸
示例 中國(guó)藥典收載地塞米松磷酸鈉的檢查，方法為：
稱(chēng)取供試品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解；另取標(biāo)準(zhǔn)磷酸鹽溶液[精密稱(chēng)取經(jīng)105℃干燥2h的磷酸二氫鉀0.35g，置1000ml量瓶中，加硫酸溶液（3→10）10ml與水適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻；臨用時(shí)再稀釋10倍]4.0ml，置另一25ml量瓶中，加水11ml；各精密加鉬酸銨硫酸試液2.5ml與1-氨基-2萘酚-4-磺酸溶液（另取無(wú)水亞硫酸鈉5g，亞硫酸氫鈉94.3G與1-氨基-萘酚-4-磺酸0.7g，充分混合，臨用時(shí)取此混合物1.5g加水10ml使溶解，必要時(shí)過(guò)濾）1ml，加水至刻度，搖勻，在20℃放置30~50min，在740nm的波長(zhǎng)處測(cè)定考試，大收集整理吸收度。供試品溶液的吸收度不得大于對(duì)照溶液的吸收度。
原理：酸性條件下，磷酸與鉬酸作用生成磷鉬酸銨，再經(jīng)還原形成磷鉬酸藍(lán)（鉬藍(lán)），在740nm波長(zhǎng)處有吸收。
二、甲醇和丙酮
示例 地塞米松磷酸鈉方法：
精密量取甲醇10μl（相當(dāng)于7.9mg）與丙酮100μl（相當(dāng)于79mg），置100ml量瓶中，精密加0.1%（ml/ml）正丙醇（內(nèi)標(biāo)物質(zhì)）溶液20ml，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照液；另取本品月約0.16g，精密稱(chēng)定，置10ml量瓶中，精密加入上述內(nèi)標(biāo)溶液2ml，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品。取上述溶液，照氣相色譜法，用高分子多孔小球色譜柱（按正丙醇計(jì)算的理論板數(shù)應(yīng)大于700），在柱溫150℃測(cè)定。含丙酮不得過(guò)5.0%（g/g），并不得出現(xiàn)甲醇峰。
本品在生產(chǎn)工藝中使用大量甲醇和丙酮，因此要檢查。甲醇的檢測(cè)限為3.1ng.
三、雌酮
炔雌酮中雌酮檢查方法如下：
取本品5mg溶于0.5ml乙醇，加間二硝基苯0.05g，再加新配制的稀氫氧化鉀-乙醇液0.5ml，在暗處放置1h后，再加乙醇10ml
時(shí)，溶液呈現(xiàn)的顏色不得比下面的對(duì)照液更深。
對(duì)照液：不加本品同樣方法制成。
原理：Zimmermann反應(yīng)，羰基的鄰位具有活潑亞甲基的化合物，在堿性的氫氧化鉀乙醇溶液中，與間二硝基苯反應(yīng)呈紅~藍(lán)色。雌酮是17-酮甾類(lèi)，因此根據(jù)該反應(yīng)生成紫紅色化合物，必須使用高純度的間二硝基苯，否則呈褐色而難于判定。
四、硒
五、其他甾體
甾體激素藥物多由甾體母體或結(jié)構(gòu)類(lèi)似的其他甾體激素制備而來(lái)，也具有一定的藥理作用而又互相不相同，使其他甾體或有關(guān)物質(zhì)的限度檢查顯得非常必要，成為甾體激素藥物純度檢查的一個(gè)重要項(xiàng)目。TLC和HPLC為各國(guó)近版藥典采用36中原料中34中采用薄層色譜法檢查；10中原料已采用HPLC法。
薄層色譜法藥典色譜條件：
1.薄層板：大多采用硅膠G板，少數(shù)采用硅膠GF254或硅膠HF254.
2.供試液和對(duì)照液的制備：取一定量供試品和對(duì)照品，分別用溶劑（如氯仿-甲醇或甲醇或氯仿或丙酮）配成一定濃度的溶液。
3.展開(kāi)劑系統(tǒng)：各種不同比例的二氯甲烷-乙醚-甲醇-水混合溶劑用得最多；還有苯、無(wú)水乙醇、二氯甲烷-甲醇-水、氯仿-甲醇、二氯甲烷-醋酸甲酯-水、苯-丙酮等混合溶劑。
4.顯色劑：堿性四氮唑藍(lán)試液；硫酸-乙醇（2：8或1：1或3：7）；20%硫酸；10%磷鉬酸-乙醇液。
5.檢測(cè)法：用堿性四氮唑藍(lán)試液作顯色劑時(shí)，以展開(kāi)劑展開(kāi)后，晾干，在105℃干燥10min，放冷，噴以堿性四氮唑藍(lán)試液，立即檢視；用硫酸-乙醇顯色劑時(shí)，以展開(kāi)劑展開(kāi)后，晾干，噴以硫酸-乙醇，在120℃或100℃加熱5min，放冷置紫外光燈（365nm）下檢視；用20%硫酸顯色時(shí)，用展開(kāi)劑展開(kāi)后，晾干，噴以20%硫酸顯色，在105℃加熱10min后檢視；用10%磷鉬酸-乙醇液時(shí)，以展開(kāi)劑展開(kāi)后，晾干，噴以10%磷鉬酸-乙醇液，在100℃加熱10~15min，在日光下檢視；某些甾體激素藥物，如醋酸去氧皮質(zhì)酮、地塞米考，試大收集整理松磷酸鈉、倍他米松磷酸鈉等采用硅膠GF254薄層板，用展開(kāi)劑展開(kāi)后，晾干，直接在紫外燈（254nm）下檢視。
判定法：按各藥品項(xiàng)下規(guī)定得雜質(zhì)斑點(diǎn)的數(shù)目和顏色的要求進(jìn)行判定。
（二）高效液相色譜法 色譜條件如下：
1.色譜填充柱：十八烷基硅烷鍵和硅膠。
2.流動(dòng)相：各種不同比例的甲醇-水混合溶劑。
3.檢測(cè)器：紫外（214nm，254nm，281nm，230nm，288nm）。
4.供試液和對(duì)照液的制備：將供試品用甲醇溶解配制成高（1）、低（2）二種濃度的溶液。
5.判定法：溶液
（1）顯示的雜質(zhì)峰數(shù)不得超過(guò)1個(gè)或3個(gè)或4個(gè)等；各雜質(zhì)峰面積劑其總和不得大于溶液
（2）主峰面積的1/2或3/4或雜質(zhì)峰面積不得大于溶液
2）主峰面積的3/4（如：黃體酮）。
即按各藥品項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì)峰的數(shù)目和面積的要求進(jìn)行判定。