第二節(jié) 鑒別實驗
母核和結(jié)構(gòu)的呈色反應、沉淀反應、制備衍生物測定熔點、水解產(chǎn)物的反應、薄層色譜法、紫外分光光度法、紅外分光光度法等都是鑒別甾體激素藥物常用的方法。
一、呈色反應
（一）與強酸的呈色反應
硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸等呈色，硫酸為主。可能機制為濃硫酸與甾體的酮基質(zhì)子化反應，形成正碳離子，然后與HSO4-作用。
特點：操作簡便，反應靈敏，通過形成的顏色或熒光的不同而互相區(qū)別，但操作條件不易掌握。
（二）官能團的呈色反應
1.C17-α-醇酮基 有還原性，能與氧化劑四氮唑鹽反應顯色。（可做薄層的顯色劑）；
2.酮基 C3-、C20-能與2，4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼等羰基試劑反應呈色。
3.甲酮基以及活潑亞甲基 能與亞硝鐵氰化鈉、間二硝基酚、芳香醛類反應呈色。
4.有機氟 經(jīng)氧瓶燃燒后生成無機氟化物，在與茜素藍及硝酸亞鈰呈色；
5.酚羥基 能與重氮磺酸反應生成紅色偶氮染料。
二、沉淀反應
1.與斐林試劑 C17-α-醇酮基具有還原性，生成橙紅色氧化亞銅沉淀。
2.氨基硝酸銀 C17-α-醇酮基，黑色金屬銀沉淀
3.硝酸銀 炔雌醇、炔諾酮，白色沉淀。
4.硝酸-硝酸銀 有機氯破壞在酸性條件下，白色沉淀。
三、制備衍生物測定其熔點
生成酯、肟、縮氨基脲，或利用醇制堿液水解甾體酯類生成相應的母體，然后測定其熔點。
1.酯的生成
2.酮肟的生成
3.縮氨基脲的生成
4.酯的水解
四、水解產(chǎn)物的反應
醋酸、戊酸和己酸酯水解后鑒別酸。
五、紫外分光光度法
C=C-C=O和C=C-C=C共軛系統(tǒng)，可用規(guī)定波長和吸收度比值法鑒別。
六、紅外分光光度法
結(jié)構(gòu)復雜，各國藥典幾乎均采用紅外分光光度法鑒別，中國藥典95版。36種原料，其中33種采用該法。
七、薄層色譜法
簡便、快速、分離效能高等特點。
方法：
供試品溶液和對照品溶液的制備 供試品通常需做前處理（如有機溶劑提取），消除注射液、片劑及軟膏劑考，試大收集整理等輔料的干擾。將處理好的供試品和對照品用規(guī)定溶劑配成一定濃度的溶液備用。
展開與檢出 將供試品與對照品在同一塊薄層板上分別點樣，用規(guī)定的展開劑展開，取出晾干，用規(guī)定的顯色劑顯色，立即檢視。供試品溶液所顯斑點與對照品溶液所顯斑點的Rf值相同。
部分甾體類藥物的薄層色譜條件歸納見表
八、高效液相色譜法
保留時間一致鑒別。
母核和結(jié)構(gòu)的呈色反應、沉淀反應、制備衍生物測定熔點、水解產(chǎn)物的反應、薄層色譜法、紫外分光光度法、紅外分光光度法等都是鑒別甾體激素藥物常用的方法。
一、呈色反應
（一）與強酸的呈色反應
硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸等呈色，硫酸為主。可能機制為濃硫酸與甾體的酮基質(zhì)子化反應，形成正碳離子，然后與HSO4-作用。
特點：操作簡便，反應靈敏，通過形成的顏色或熒光的不同而互相區(qū)別，但操作條件不易掌握。
（二）官能團的呈色反應
1.C17-α-醇酮基 有還原性，能與氧化劑四氮唑鹽反應顯色。（可做薄層的顯色劑）；
2.酮基 C3-、C20-能與2，4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼等羰基試劑反應呈色。
3.甲酮基以及活潑亞甲基 能與亞硝鐵氰化鈉、間二硝基酚、芳香醛類反應呈色。
4.有機氟 經(jīng)氧瓶燃燒后生成無機氟化物，在與茜素藍及硝酸亞鈰呈色；
5.酚羥基 能與重氮磺酸反應生成紅色偶氮染料。
二、沉淀反應
1.與斐林試劑 C17-α-醇酮基具有還原性，生成橙紅色氧化亞銅沉淀。
2.氨基硝酸銀 C17-α-醇酮基，黑色金屬銀沉淀
3.硝酸銀 炔雌醇、炔諾酮，白色沉淀。
4.硝酸-硝酸銀 有機氯破壞在酸性條件下，白色沉淀。
三、制備衍生物測定其熔點
生成酯、肟、縮氨基脲，或利用醇制堿液水解甾體酯類生成相應的母體，然后測定其熔點。
1.酯的生成
2.酮肟的生成
3.縮氨基脲的生成
4.酯的水解
四、水解產(chǎn)物的反應
醋酸、戊酸和己酸酯水解后鑒別酸。
五、紫外分光光度法
C=C-C=O和C=C-C=C共軛系統(tǒng)，可用規(guī)定波長和吸收度比值法鑒別。
六、紅外分光光度法
結(jié)構(gòu)復雜，各國藥典幾乎均采用紅外分光光度法鑒別，中國藥典95版。36種原料，其中33種采用該法。
七、薄層色譜法
簡便、快速、分離效能高等特點。
方法：
供試品溶液和對照品溶液的制備 供試品通常需做前處理（如有機溶劑提取），消除注射液、片劑及軟膏劑考，試大收集整理等輔料的干擾。將處理好的供試品和對照品用規(guī)定溶劑配成一定濃度的溶液備用。
展開與檢出 將供試品與對照品在同一塊薄層板上分別點樣，用規(guī)定的展開劑展開，取出晾干，用規(guī)定的顯色劑顯色，立即檢視。供試品溶液所顯斑點與對照品溶液所顯斑點的Rf值相同。
部分甾體類藥物的薄層色譜條件歸納見表
八、高效液相色譜法
保留時間一致鑒別。