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    高考生物實(shí)驗(yàn)題：檢測(cè)生物組織中的糖類等
    生物是一門實(shí)操性較高的實(shí)用性學(xué)科，在高考生物試卷中，實(shí)驗(yàn)題是必考題之一，也是高考復(fù)習(xí)的重點(diǎn)難點(diǎn)。高分網(wǎng)高考頻道小編提供高中生物部分典型實(shí)驗(yàn)題的解析：檢測(cè)生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)，幫助考生攻克高考生物實(shí)驗(yàn)題難關(guān)。
    實(shí)驗(yàn)：檢測(cè)生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)
    一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
    嘗試用化學(xué)試劑檢測(cè)生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì)，闡明實(shí)驗(yàn)原理—顏色反應(yīng)，識(shí)記和區(qū)分用于可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)鑒定的試劑及產(chǎn)生的特定顏色，初步掌握鑒定上述化合物的基本方法，學(xué)會(huì)描述實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。
    二、實(shí)驗(yàn)原理：
    某些化學(xué)試劑能使生物組織中的有關(guān)有機(jī)化合物，產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。
    1、生物組織中普遍存在的可溶性糖類較多，有葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖。前三種糖的分子內(nèi)都含有游離的具還原性的半縮醛羥基，因此叫做還原糖;蔗糖分子內(nèi)沒(méi)有，為非還原糖。實(shí)驗(yàn)中所用的斐林試劑，只能鑒定生物組織中可溶性還原糖，而不能鑒定可溶性非還原糖。
    可溶性還原糖(如葡萄糖、果糖、麥芽糖)與斐林試劑發(fā)生作用，可生成磚紅色的Cu 2O沉淀。如：
    葡萄糖 + 2Cu2+ + 4OH— 加熱 葡萄糖酸 + Cu 2O↓(磚紅色)+ H 2O
    即Cu 2+被還原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。
    用斐林試劑鑒定還原糖時(shí)，溶液變化過(guò)程為：淺藍(lán)色→棕色→磚紅色沉淀
    淀粉遇碘變藍(lán)色(直鏈)或紫(紅)色(支鏈)。
    2、脂肪和類脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)統(tǒng)稱為脂類。它是構(gòu)成人體組織的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶劑中。在化學(xué)組成上，脂類屬于脂肪酸的酯或與這些酯有關(guān)的物質(zhì)。脂類的主要功能是氧化供能。
    脂肪主要存積于脂肪組織中，并以油滴狀的微粒存在脂肪細(xì)胞漿內(nèi)。
    在病理檢驗(yàn)中，脂類染色法最常用以證明脂肪變性，脂肪栓子以及腫瘤的鑒別。脂類染色使用最廣泛的染料是蘇丹染料，最常用的有蘇丹Ⅲ，蘇丹Ⅳ，蘇丹黑及油紅O等。脂肪被染色，實(shí)際上是蘇丹染料被脂肪溶解吸附而呈現(xiàn)染料的顏色。經(jīng)研究認(rèn)為組織中脂質(zhì)在液態(tài)或半液態(tài)時(shí)，對(duì)蘇丹染料著色效果最好。根據(jù)這一原理，適當(dāng)提高溫度(37℃-60℃)對(duì)組織切片染色效果是有好處的。
    脂類染色，用冰凍或石蠟切片，以水溶性封固劑封固，如甘油、明膠和阿拉伯糖膠等。
    脂肪可以被蘇丹Ⅲ染液染成橘黃色或橙紅色(或被蘇丹Ⅳ染液染成紅色)，膽脂素呈淡紅色，脂肪酸不著色，細(xì)胞核呈藍(lán)色。
    3、蛋白質(zhì)與雙縮脲試劑發(fā)生作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。(蛋白質(zhì)分子中含有很多肽鍵，在堿性NaOH溶液中能與雙縮脲試劑中的Cu2+作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。)
    
    三、實(shí)驗(yàn)材料：
    1、做可溶性還原性糖鑒定實(shí)驗(yàn)，應(yīng)選含糖高，顏色為白色的植物組織，如蘋果、梨。(因?yàn)榻M織的顏色較淺，易于觀察。)經(jīng)試驗(yàn)比較，顏色反應(yīng)的明顯程度依次為蘋果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜。
    2、做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)。應(yīng)選富含脂肪的種子，以花生種子為最好，實(shí)驗(yàn)前一般要浸泡3~4小時(shí)(也可用蓖麻種子)。
    3、做蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)，可用富含蛋白質(zhì)的黃豆或雞蛋清。
    4、淀粉的鑒定：馬鈴薯勻漿。
    四、實(shí)驗(yàn)用具：雙面刀片、試管(最好用刻度試管)、試管夾、試管架、大小燒杯、小量筒、滴管、酒精燈、三腳架、石棉網(wǎng)、火柴、載玻片、蓋玻片、毛筆、吸水紙、顯微鏡
    五、實(shí)驗(yàn)試劑：
    1.斐林試劑(包括甲液：質(zhì)量濃度為0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：質(zhì)量濃度為0.05g/ mL CuSO4溶液)
    2.蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液
    3.雙縮脲試劑(包括A液：質(zhì)量濃度為0.1g/ mL NaOH溶液和B液：質(zhì)量濃度為0.01g/ mL CuSO4溶液)
    4.體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精溶液
    5.碘液
    6.蒸餾水
    六、方法步驟：
    一、可溶性糖的鑒定
    

操 作 方 法	注 意 問(wèn) 題	解 釋
1. 制備組織樣液。          （去皮、切塊、研磨、過(guò)濾）	蘋果或梨組織液必須臨時(shí)制備。	因蘋果多酚氧化酶含量高，組織液很易被氧化成褐色，將產(chǎn)生的顏色掩蓋。
2. 取1支試管，向試管內(nèi)注入2mL組織樣液。
3. 向試管內(nèi)注入1mL新制的斐林試劑，振蕩。	應(yīng)將組成斐林試劑的甲液、乙液分別配制、儲(chǔ)存，使用前才將甲、乙液等量混勻成斐林試劑；                     切勿將甲液、乙液分別加入蘋果組織樣液中進(jìn)行檢測(cè)。	斐林試劑很不穩(wěn)定，甲、乙液混合保存時(shí)，生成的Cu ( OH ) 2在70~ 900C下分解成黑色CuO和水；          甲、乙液分別加入時(shí)可能會(huì)與組織樣液發(fā)生反應(yīng)，無(wú)Cu OH生成。
4. 試管放在盛有50-650C溫水的大燒杯中，加熱約2分鐘，觀察到溶液顏色：淺藍(lán)色 →棕色 → 磚紅色（沉淀）	最好用試管夾夾住試管上部，使試管底部不觸及燒杯底部，試管口不朝向?qū)嶒?yàn)者。          也可用酒精燈對(duì)試管直接加熱。	防止試管內(nèi)的溶液沖出試管，造成燙傷；                                縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

    二、脂肪的鑒定
    

操 作 方 法	注 意 問(wèn) 題	解 釋
花生種子浸泡、去皮、切下一些子葉薄片，將薄片放在載玻片的水滴中，用吸水紙吸去裝片中的水。	干種子要浸泡3~4小時(shí)，新花生的浸泡時(shí)間可縮短。	因?yàn)榻輹r(shí)間短，不易切片；浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，組織較軟，切片不易成形。切片要盡可能薄些，便于觀察。
在子葉薄片上滴2~3滴蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液，染色1分鐘。	染色時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。
用吸水紙吸去薄片周圍染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。		酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，會(huì)影響對(duì)橘黃色脂肪滴的觀察。同時(shí)，酒精是脂溶性溶劑，可將花生細(xì)胞中的脂肪顆粒溶解成油滴。
用吸水紙吸去薄片周圍酒精，滴上1~2滴蒸餾水，蓋上蓋玻片。		滴上清水可防止蓋蓋玻片時(shí)產(chǎn)生氣泡。
低倍鏡下找到花生子葉薄片的最薄處，可看到細(xì)胞中有染成橘黃色或紅色圓形小顆粒。	裝片不宜久放。	時(shí)間一長(zhǎng)，油滴會(huì)溶解在乙醇中。

    三、蛋白質(zhì)的鑒定
    

操 作 方 法	注 意 問(wèn) 題	解 釋
制備組織樣液。          （浸泡、去皮研磨、過(guò)濾。）		黃豆浸泡1至2天，容易研磨成漿，也可購(gòu)新鮮豆?jié){以節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
鑒定。加樣液約2ml于試管中，加入雙縮脲試劑A，搖勻；再加入雙縮脲試劑B液3~4滴，搖勻，溶液變紫色。	A液和B液也要分開配制，儲(chǔ)存。鑒定時(shí)先加A液后加B液。                     CuSO4溶液不能多加。	先加NaOH溶液，為Cu2+與蛋白質(zhì)反應(yīng)提供一個(gè)堿性的環(huán)境。A、B液混裝或同時(shí)加入，會(huì)導(dǎo)致Cu2+變成Cu ( OH ) 2沉淀，而失效。          否則CuSO4的藍(lán)色會(huì)遮蓋反應(yīng)的真實(shí)顏色。
可用蛋清代替豆?jié){。	蛋清要先稀釋。	如果稀釋不夠，在實(shí)驗(yàn)中蛋清粘在試管壁，與雙縮脲試劑反應(yīng)后會(huì)粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不容易徹底，并且試管也不易洗干凈。
附：淀粉的檢測(cè)和觀察          用試管取2ml待測(cè)組織樣液，向試管內(nèi)滴加2滴碘液，觀察顏色變化。	碘液不要滴太多	以免影響顏色觀察

    七、考點(diǎn)提示：
    1、常見還原性糖與非還原性糖有哪些? 答：葡萄糖、果糖、麥芽糖都是還原性糖;淀粉、蔗糖、纖維素都是非還原性糖。
    2、還原性糖植物組織取材條件? 答：含糖量較高、顏色為白色或近于白色，如：蘋果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜等。
    3、研磨中為何要加石英砂?不加石英砂對(duì)實(shí)驗(yàn)有何影響?
    答：加石英砂是為了使研磨更充分。不加石英砂會(huì)使組織樣液中還原性糖減少，使鑒定時(shí)溶液顏色變化不明顯。
    4、斐林試劑甲、乙兩液的使用方法?混合的目的?為何要現(xiàn)混現(xiàn)用? 答：混合后使用;產(chǎn)生氫氧化銅;氫氧化銅不穩(wěn)定。
    5、還原性糖中加入斐林試劑后，溶液顏色變化的順序?yàn)? 答：淺藍(lán)色 棕色 磚紅色。
    6、花生種子切片為何要薄? 答：只有很薄的切片，才能透光，而用于顯微鏡的觀察。
    7、轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋時(shí)，若花生切片的細(xì)胞總有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么? 答：切片的厚薄不均勻。
    8、脂肪鑒定中乙醇作用? 答：洗去浮色。
    9、雙縮脲試劑A、B兩液是否混合后用?先加A液的目的怎樣通過(guò)對(duì)比看顏色變化?
    答：不能混合;先加A液的目的是使溶液呈堿性;先留出一些大豆組織樣液做對(duì)比。